Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, y Stenotrophomonas maltophilia han sido reportados entre las principales especies bacterianas responsables de Infecciones Nosocomiales (IN). El objetivo de este trabajo fue identificar microorganismos de estos géneros bacterianos tanto en el ambiente como en pacientes de la Unidad de Terapia Intensiva (UTI) y el Servicio de Neonatología (SN) del Hospital Universitario de Caracas (HUC), y analizar sus perfiles de resistencia a antibióticos y distribución en el ambiente hospitalario. Se recolectaron muestras de superficies inanimadas y manos del personal, por un periodo de un año. La identificación bacteriana se realizó por baterías bioquímicas y sistemas automatizados, y la resistencia a los antibióticos por el método de difusión en disco. Los resultados mostraron que el 58% de los aislados provenientes de pacientes pertenecieron a los géneros estudiados. Se aislaron cepas de los géneros estudiados en la UTI (54) y el SN (39), respectivamente. El 67,5% de aislados de pacientes fueron resistentes al menos a 7 antibióticos. Los aislados ambientales del SN presentaron alta susceptibilidad a antibióticos, no los de UTI. La alta distribución de estos géneros bacterianos asociados a IN, multiresistentes a antibióticos, es indicativo de la necesidad de monitoreo constante en los Centros de Salud.